概述
由于無菌工藝對技術(shù)依賴性高并且對患者可能造成潛在的危害，無菌藥物的生產(chǎn)工藝一直是藥物生產(chǎn)過程中關(guān)鍵的工藝步驟，無菌生產(chǎn)過程工藝核查由各國藥監(jiān)部門分別執(zhí)行，如美國FDA，WHO和EMA都要求對無菌工藝進行核查，因此知曉各個國家對“藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范”（GMP）的規(guī)范條款以及條款適用情形對藥企來說是十分必要的。
值得一提的是，大多數(shù)GMP規(guī)范條款僅描述了需要完成哪些工作項目，卻沒有敘述應該如何完成這些工作。因此這就需要企業(yè)建立起一套嚴謹審慎的系統(tǒng)方法來保證工藝符合GMP的規(guī)范要求。
本文對無菌藥物相關(guān)的規(guī)范性指導原則和GMP基本的要求進行了概要性介紹，著重介紹工藝方面的規(guī)范要求。
生產(chǎn)工藝是產(chǎn)品質(zhì)量保證的基礎，與產(chǎn)品的質(zhì)量控制同樣非常重要。生產(chǎn)工藝規(guī)程必須事先確定且經(jīng)過驗證，生產(chǎn)過程必須嚴格執(zhí)行經(jīng)過驗證的操作方法。無菌工藝操作要求人員間緊密配合協(xié)作，溝通交流，以及具備相應的設備體系，潔凈室和相關(guān)設施，無菌組件。
本文列出了不同國家藥監(jiān)部門對廠房，實驗室等級標準，區(qū)域等級標準，設備，人員，工藝和滅菌的要求（主要以WHO指導原則為主介紹，與其他地區(qū)指導原則對比的異同）
在設計和生產(chǎn)藥物制劑工藝過程中，我們應該加強引入風險管理定義（ICH Q9）和現(xiàn)代制藥質(zhì)量體系（ICH Q10）的理念。無菌藥物應該在潔凈區(qū)域生產(chǎn)，根據(jù)工藝步驟我們可以將無菌制劑分為以下兩類：
1. 終端滅菌的產(chǎn)品
2. 部分或者全部步驟實施無菌生產(chǎn)的產(chǎn)品
無菌制劑的生產(chǎn)
為了減少細微?；蛘?/span>微生物污染給產(chǎn)品質(zhì)量造成的潛在風險，無菌制劑每一步的生產(chǎn)操作環(huán)境必須具備規(guī)定水平的潔凈度。
在產(chǎn)品的生產(chǎn)過程中，推薦使用單獨的設備生產(chǎn)含活性微生物或者不含活性微生物的產(chǎn)品，除非產(chǎn)品含特定的滅活微生物、去活化/容器已經(jīng)被充分的證明或者驗證的情況除外。除此以外，在滅菌前的工藝過程也需要盡可能降低生物負荷。
WHO指導原則建議應該盡量縮短各個工序步驟之間的時間間隔，并且對間隔時間進行驗證，例如，設備清潔和滅菌的間隔，設備滅菌和成型的間隔，成型和產(chǎn)品滅菌的間隔。除此以外，指導原則強調(diào)了隔離器技術(shù)（Isolator technology）和吹填封技術(shù)（blow-fill-seal technologies）的優(yōu)勢以及實施過程中的注意事項。隔離器和袖管或手套系統(tǒng)應該進行常規(guī)監(jiān)測，以及依照特定頻率進行泄漏測試是歐盟GMP和WHO重點關(guān)注內(nèi)容。
環(huán)境監(jiān)測計劃是實驗室控制的重要環(huán)節(jié)之一。監(jiān)測計劃應涵蓋全部的生產(chǎn)班次，以及空氣，地面，墻面和設備表面，尤其與產(chǎn)品，容器和包材直接接觸的表面。
滅菌
通常來說，各個國家藥監(jiān)部門可以接受不同的滅菌方法，例如熱滅菌，過濾除菌法，輻射滅菌法，環(huán)氧乙烷(EtO)滅菌；但是熱滅菌法是首選使用的滅菌方法。各種負荷類型和負荷模式都需要經(jīng)過驗證。應該使用生物指示劑作為附加的滅菌監(jiān)測方法，例如高壓滅菌指示帶和具有顏色變化的輻射指示片，都可以清晰的識別出物體處于的滅菌狀態(tài)。
無菌藥物應盡可能的選終端滅菌的方法，盡可能在最終容器中采用熱滅菌方式進行。如果由于制劑的穩(wěn)定性原因或者包裝材料相容性的因素使產(chǎn)品不能采用最終容器熱滅菌的方式，那么可以考慮采用過濾除菌的方法。由于無菌等級的濾膜無法完全去除病毒和支原體，這種情形下可以考慮采用一定程度的熱滅菌方式作為過濾除菌的補充。
指導原則還建議在灌裝前接近灌裝點的位置采用另一新的無菌級別的濾膜進行二次過濾。濾膜的最大使用時間需要經(jīng)過驗證。濾膜的完整性測試也在指導原則中有所規(guī)定，濾膜纖維應該不脫落，并且濾膜的吸收或浸出過程應該不會影響產(chǎn)品組成成分。
FDA指導原則要求無菌測定方法應該是準確且可重復的；EU，GMP和WHO要求無菌制劑的測定方法應該是保證產(chǎn)品無菌的一系列質(zhì)量控制的最終環(huán)節(jié)。測定應該使用的待測的產(chǎn)品進行驗證。
人員
指導原則建議潔凈區(qū)內(nèi)的人員應該盡可能減少。在潔凈區(qū)工作的人員，包括清潔工和設備維修工都應該接受培訓，掌握生產(chǎn)（無菌技術(shù)），潔凈室行為規(guī)范，人員衛(wèi)生，穿著隔離服和微生物方面的基礎知識。為了減少交叉污染，潔凈室應雇傭稱職人員，否則需要執(zhí)行極其嚴格的清潔流程操作。
嚴格禁止佩戴手表，首飾，涂抹化妝品。指導原則還給出了隔離服適用的要求，包括潔凈室等級，隔離服材料質(zhì)量，更換衣服手套的頻率，手套的消毒，獨立專用的洗衣設備。
廠房
各個國家的藥監(jiān)部門一致認為，廠房或者區(qū)域的設計應該滿足生產(chǎn)操作過程中微生物和微粒方面的相關(guān)要求，同時也要符合設備，組分材料和產(chǎn)品的要求。
建議采用光滑，防滲，易于消毒的表面，以及密封吊頂。A或B級區(qū)域建議避免安裝水池。其他潔凈級別的區(qū)域內(nèi)下水管應配備帶有空氣阻斷功能的裝置，地漏應該帶有水封/阻斷功能。
在房間壓差，空氣流速，氣流模式，更衣室連鎖系統(tǒng)，更衣室數(shù)量（建議入口和出口安排單獨的房間）。門應朝向高壓側(cè)打開，并且要配有自鎖系統(tǒng)，以限制人員進出關(guān)鍵生產(chǎn)區(qū)域。
空氣中顆粒物濃度的潔凈等級劃分應該依照ISO 14644-1標準中潔凈室的分類標準（表1）。以下公式定義了最大允許粒子濃度，Cn (每立方米的粒子數(shù)量)，粒徑D（微米）其中：
Cn 為大于或等于考察粒徑的粒子的最大允許濃度（每立方米的粒子數(shù)量）
N為ISO 等級級別
D 為考察的粒徑 (微米)
US FDA 規(guī)定僅考察運轉(zhuǎn)的條件，粒徑僅考察0.5um。EU GMP和WHO認為“靜態(tài)”和“動態(tài)”條件的限度標準應該相同，5um和0.5um的粒徑都需要進行考察。EU GMP和WHO指導原則沒有定義D級的“動態(tài)”限度標準；制藥企業(yè)應該綜合風險分析結(jié)果和歷史數(shù)據(jù)（如適用），建立企業(yè)內(nèi)部“動態(tài)”限度標準。
動態(tài)生產(chǎn)過程中，生產(chǎn)廠應該對空氣粒子和微生物污染的狀態(tài)進行監(jiān)控。FDA沒有將培養(yǎng)皿法作為連續(xù)空氣取樣的強制方法。但是WHO/EUGMP 強制要求培養(yǎng)皿法和手套標識。
新版EU GMP 附件15（校驗和驗證）已經(jīng)向公眾發(fā)布，新版文件對設施設備，裝置和流程的校驗和驗證進行介紹。附件15 還對比給出了比較其他法規(guī)的區(qū)別，包括EudraLex 4卷I部的其他內(nèi)容，II部，附件11，ICH Q8，Q9，Q10，Q11，QWP 法規(guī)體系中關(guān)于工藝驗證以及生產(chǎn)技術(shù)變更的內(nèi)容指導原則。
設備
生產(chǎn)設備方面，指導原則建議傳送帶不能在A/B級潔凈區(qū)域與較低級別的潔凈區(qū)之間傳送，除非傳送帶本身能夠持續(xù)執(zhí)行滅菌。此外，建議在潔凈區(qū)域外放置安裝設備；在設備維修后，應對設備和潔凈室進行清潔和消毒/滅菌，除非維修時對潔凈度和無菌狀態(tài)沒有影響時可以省略此步驟。WHO推薦應盡可能使用干熱/濕熱滅菌法來對設備進行滅菌。
其他指導原則
國際制藥工程協(xié)會（ISPE）撰寫的關(guān)于無菌藥物生產(chǎn)設備的指南，在設施設計，建造，試運轉(zhuǎn)和校驗方面內(nèi)容十分具有參考價值。該文件以本文引用的指導原則為基礎，提出了大量在實踐過程中的操作指導，以及實踐良好操作規(guī)范過程中的大量豐富詳實的案例。
除此以外還有一些其他行業(yè)標準和指導原則，如ISO 13408-1 standard“健康保健產(chǎn)品的無菌工藝”對于無菌工藝的設計非常有幫助。
